۴۴۰/۰ml

۲۲۰/۰ml

اکریل آمید ۴۰%

—–

——

بافر تریس ۲ مولار ۸/۸

۴۸۰/۰ml

۲۴۰/۰ml

بافر تریس ۵/۰ مولار ۸/۶

۷۲۰/۲ml

۳۶۰/۱ml

اوره ۹ مولار

۳۳۰/۰ml

۱۶۵/۰ml

آب مقطر

۳۰ μl

۱۵ μl

APS %۱۰

۴ μl

۲ μl

TEMED

۲-۱۳-۳- آماده‌سازی نمونه‌ها
۱) به تعداد نمونه‌هایی که با شتاب g3000 سانتریفوژ شده، ویال ۵/۰ میلی‌لیتری برداشته و شماره‌ گذاری گردید.
۲) از مایع رویی ویال‌های سانتریفوژ شده، ۵۰ میکرولیتر نمونه داخل ویال ۵/۰ ریخته شد.
۳) در یک ویال دیگر ۳۰۰ میکرولیتر از بافر نمونه مخلوط گردید و از این ویال ۲۵ میکرولیتر به ویال‌های حاوی مایع رویی اضافه شد.
۴) همگی ویال‌ها ورتکس شده و ۵ دقیقه در آب جوش نگه داشته می‌شوند.
۵) از BLG طبیعی نوع A به عنوان شاهد استفاده شد. به منظور آماده کردن نمونه شاهد، ۱ میلی‌گرم از بتالاکتوگلوبولین توزین شده و در داخل ویال ریخته و با آب مقطر به حجم ۱ میلی‌لیتر رسانده شد. از این نمونه هم ۵۰ میکرولیتر برداشته و با ۲۵ میکرولیتر بافر نمونه آماده شده در مرحله ۳ مخلوط گردید. ورتکس و ۵ دقیقه نگه داری در آب جوش برای این نمونه نیز انجام شد.

( اینجا فقط تکه ای از متن پایان نامه درج شده است. برای خرید متن کامل فایل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت feko.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. )

۶) سپس با میکروپیپت ۳۰ میکرولیتر از هر ویال را در داخل چاهک می‌ریزیم. باید دقت شود که محتوای هر چاهک وارد چاهک دیگر نشود و نمونه‌ها به گونه‌ای تزریق شود که خوب در چاهک ها بنشیند.
۷) سپس منبع برق را روشن کرده و جریان را به ازای هر ژل در قسمت پشته سازی ۱۰ میلی‌آمپر و در قسمت تفکیک کننده ۲۰ میلی‌آمپر تنظیم شد و ولتاژ را روی ۱۰۰ تنظیم گردید.
۸)در حدود ۵/۱ ساعت زمان می‌برد تا نمونه‌ها مهاجرت کنند و به انتهای کاست برسند. هنگامی که رنگ آبی به انتهای کاست رسید جریان قطع می‌گردد.
۲-۱۴- آزمون ضدباکتریایی
۲-۱۴-۱- تهیه کدورت نیم مک‌فارلند
۱)۵/۰ میلی لیتر از کلرور باریوم (BaCl2) به ۵/۹۹ میلی لیتر اسید سولفوریک اضافه شد و با هم زدن مداوم سوسپانسیون بدست آمد .
۲)چگالی صحیح کدورت استاندارد با بهره گرفتن از اندازه گیری جذب در اسپکتروفتومتر با طول مسیر نوری یک سانتی متر ، مشخص شد. جذب در nm625 باید بین ۰۸/۰ تا ۱۳/۰ باشد .
۳)سوسپانسیون سولفات باریوم به مقدار ۴ تا ۶ میلی متر در لوله های درپیچ دار هم اندازه با لوله های سوسپانسیون باکتریایی ریخته شد .

موضوعات: بدون موضوع  لینک ثابت


فرم در حال بارگذاری ...